公司產(chǎn)品僅供科研使用，下列是產(chǎn)品屬性：

商品介紹：

測(cè)定意義:

單寧是一類(lèi)廣泛存在于植物體內(nèi)的多元酚化合物，又稱(chēng)植物多酚。具有*的化學(xué)性質(zhì)和多種生理活性，如能與蛋白質(zhì)、生物堿、多糖結(jié)合；能與多種金屬離子發(fā)生絡(luò)合或靜電作用；具有止血、抑制微生物、抗過(guò)敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。

測(cè)定原理：

單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應(yīng)，生成藍(lán)色化合物，在760nm處有大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。
注意事項(xiàng)：

①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

實(shí)驗(yàn)步驟：

(1)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前將RNA提取液于65℃水浴鍋中預(yù)熱,離心管中加入ME(巰基乙醇),(10mL加80ul,50mL中加入300ul)

(2)取約0.8g菌絲體(液體培養(yǎng)獲得的菌絲用真空抽濾即可！固體培養(yǎng)就更好說(shuō)了),在液氮中迅速磨成精細(xì)粉末,裝入50mL離心管,按1g材料8mL的量加入預(yù)熱的RNA提取液,顛倒混勻

(3)65℃水浴3-10 min,期間混勻2-3次

(4)加入等體積的酚(注意是酸酚pH4.5)::異戊醇(25:24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(5)取上清,等體積的:異戊醇(24:1)抽提(10,000rpm,4℃,5 min)

(6)加入1/4V體積10M LiCl溶液,4℃放置6h以上(或過(guò)夜)

(7)10,000rpm,4℃離心20min

(8)棄上清,用500ul SSTE溶解沉淀

(9)酚::異戊醇(25:24:1)抽提兩次,:異戊醇(24:1)抽提1次(10,000rpm,4℃,5min)

(10)加2V體積的無(wú)水乙醇,在-70℃冰箱沉淀30min以上

(11)12,000rpm,4℃離心20 min

(12)棄上清.沉淀用70%酒精漂洗一次,干燥

(13)加200ul的DEPC處理水溶解

(14)用非變性瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計(jì)掃描檢測(cè)RNA的質(zhì)量

(在抽提過(guò)程中,若蛋白質(zhì)含量或其它的雜質(zhì)還較多,可以增加抽提次數(shù))

ALCAM Protein Rat 重組大鼠 ALCAM / CD166 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Actin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta 0.5mgActin Alpha /Alpha-SMA (Actin alpha , smooth muscle aorta) 肌動(dòng)蛋白(抗原)

ENPP2重組小鼠 Autotaxin / ENPP2 / NPP2 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

FCGR3A Protein Human 重組人 CD16a / FCGR3A 蛋白 (176 Val, His 標(biāo)簽)

ANTXR1重組人 ANTXR1 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子域7抗原

ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽)

HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標(biāo)簽)

EGFL7(EGF-like domain containing protein 7 0.5mgEGFL7(EGF-like domain containing protein 7) 類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子域7抗原

NRG1 Protein Human 重組人 NRG1-alpha 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽)

IL12B重組大鼠 IL12B / IL-12B 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

HPX Protein Mouse 重組小鼠 Hemopexin / HPX 蛋白 (His 標(biāo)簽)

ITGA8 & ITGB1重組人 ITGA8 & ITGB1 Heterodimer 蛋白 Protein

FCGR1 Protein Rat 重組大鼠 CD64 / FCGR1A 蛋白 (His 標(biāo)簽)

Dickkopf相關(guān)蛋白2(DKK2)重組蛋白 Recombinant Dickkopf Related Protein 2 (DKK2)

IFNG重組小鼠 IFNG / Interferon Gamma 蛋白 (Fc 標(biāo)簽) Protein

ANGPT4重組人 Angiopoietin 4 / ANG4 / ANGPT4 蛋白 (His 標(biāo)簽) Protein

SCGN Protein Human 重組人 SCGN / Secretagogin 蛋白 (His 標(biāo)簽)
單寧含量測(cè)試盒(微量法)dog IgG/RBITC 羅丹明標(biāo)記狗IgG 0.3ml

LRRC15 英文名稱(chēng)： 富含亮酸重復(fù)蛋白15抗體 0.2ml

Rhesus antibody Rh Dnmt3 Beta DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3β抗體 規(guī)格 0.2ml

ACA-IgG(Mouse anti-cardiolipin antibody IgG) ELISA Kit 小鼠抗心磷脂抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 48T

赭曲霉A檢測(cè)試劑盒 96孔/盒 糧食作物(玉米、大米、豆類(lèi)、花生、麥類(lèi)等)、、飼料等

Anti-CK5/6 /FITC 熒光素標(biāo)記細(xì)胞角蛋白5/6抗體IgGMulti-class antibodies規(guī)格： 0.2ml

操作程序：

注意：最重要的是及時(shí)固定，并在固定液中加入0.1%的DEPC處理，以抑制RNA酶對(duì)mRNA的分解作用。此外，過(guò)度固定對(duì)原位雜交有明顯的不利影響。

1．玻片的處理：一般采用多聚賴(lài)氨酸或APES。切片厚度10-20μm。

2．細(xì)胞在多聚賴(lài)氨酸處理的蓋玻片上進(jìn)行培養(yǎng)，條件為37℃和5%的CO2，所用培養(yǎng)基為Dulbecco基礎(chǔ)培養(yǎng)基。細(xì)胞長(zhǎng)好后0.1M PBS(PH7.4)洗2分鐘×3次。

3．培養(yǎng)細(xì)胞和冰凍切片均可用下述方法固定：固定液為4%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 20--30分鐘。蒸餾水充分洗滌，干燥后-20℃冰凍可保存2周以上。

4．30%H2O2 1份+純甲醇50份混合，室溫處理30分鐘。蒸餾水洗滌3次。

5．暴露mRNA核酸片段：切片上滴加3%檸檬酸新鮮稀釋1ml 3% 檸檬酸加2滴濃縮型，混勻)，37℃或室溫消化5—120秒鐘。有時(shí)也可以不消化。原位雜交用 PBS洗3次×5分鐘。蒸餾水洗1次。

6.后固定：消化后才需要。固定液為1%多聚甲醛/0.1 M PBS(PH7.2-7.6)，含有1/1000 DEPC。室溫固定 10分鐘。蒸餾水洗滌3次。

7．預(yù)雜交：濕盒的準(zhǔn)備——干的雜交盒底部加20%甘油20ml以保持濕度。按每張切片20μι加預(yù)雜交液。恒溫箱38-42℃2—4小時(shí)。吸取多余液體，不洗。

8．雜交——按每張切片20μι雜交液，加在切片上。將原位雜交專(zhuān)用蓋玻片的保護(hù)膜揭開(kāi)后，蓋在切片上。恒溫箱38-42℃雜交過(guò)夜(根據(jù)雜交情況可以調(diào)節(jié))。

9．雜交后洗滌：揭掉蓋玻片，37℃左右水溫的2×SSC洗滌5分鐘×2次；37℃0.5×SSC洗滌15分鐘×1次; 37℃0.2×SSC洗滌15分鐘×1次(如果有非特異性染色，重復(fù)0.2×SSC洗滌15分鐘×1-2次)。

10.滴加封閉液：37℃30分鐘。甩去多余液體，不洗

11.滴加化鼠抗*：37℃ 60分鐘或室溫120分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

12.滴加SABC：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×3次。勿用其它緩沖液和蒸餾水洗滌。

13.滴加化過(guò)氧化物酶：37℃20分鐘或室溫30分鐘。原位雜交用PBS洗5分鐘×4次。

14.DAB顯色：使用DAB顯色試劑盒—1ml蒸餾水加顯色劑Ａ，Ｂ，C各一滴，混勻，加至標(biāo)本上。一般顯色20-30分鐘。若無(wú)背景出現(xiàn)則可繼續(xù)顯色。也可自配DAB顯色劑后顯色。充分水洗。

15.必要時(shí)蘇木素復(fù)染，充分水洗。

16.酒精脫水，二甲苯透明，封片。